臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)職稱

室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）是實(shí)驗(yàn)室人員采用一系列方法，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠程度。確定報(bào)告能否發(fā)出，是保證實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量的重要措施。目前采供血機(jī)構(gòu)檢測(cè)抗HCV、抗HIV、HBsAg均采用ELISA法，ELISA有其自身的特點(diǎn)，如靈敏度較高，同時(shí)影響因素也較多，這就更需加強(qiáng)質(zhì)量控制。本文就實(shí)驗(yàn)室內(nèi)過程中出現(xiàn)一些問題及其對(duì)策報(bào)告如下。
　
1　質(zhì)控物室內(nèi)質(zhì)控的開展要求有高質(zhì)量的質(zhì)控物，質(zhì)控物的好壞直接影響監(jiān)測(cè)，一般基層單位均選用衛(wèi)生部臨檢中心或省檢驗(yàn)中心提供的免疫質(zhì)控血清，其具有良好的質(zhì)量保證，但是在貯存運(yùn)輸和使用過程中受許多因素的影響。質(zhì)控物的購(gòu)買應(yīng)避開7月、8月、9月高溫季節(jié)，以免郵寄過程中造成含量下降。質(zhì)控物要求-20 ℃保存，而質(zhì)控物含量較低，4 ℃存放也會(huì)使含量下降。一般HBsAg使用3 d，抗HCV使用1周即需更換。避免反復(fù)凍融，因反復(fù)凍融能使蛋白質(zhì)變性抗，原成分及空間構(gòu)象發(fā)生改變。
　
2　試劑從1994年10月起衛(wèi)生部對(duì)診斷試劑實(shí)行統(tǒng)一管理批批檢定。目前使用的國(guó)內(nèi)試劑廠家很多。能通過批批檢定只是起碼要求，其靈敏度和特異性都有差異。加之運(yùn)輸儲(chǔ)存多種因素影響，到用戶使用時(shí)質(zhì)量已經(jīng)發(fā)生了不同程度的變化，盡管省放免中心對(duì)10多家試劑進(jìn)行了初篩，但目前仍無權(quán)威部門發(fā)布的試劑評(píng)價(jià)結(jié)果，總之初檢試劑應(yīng)選片段全，靈敏度高的，復(fù)檢選項(xiàng)特異性好的試劑。
　
3　加樣與稀釋

3.1　減少誤差由于免疫試劑加樣為10 μl，多加或少加1 μl就可造成10%的誤差，因此移液器的準(zhǔn)確性需經(jīng)常校驗(yàn)，最好使用進(jìn)口移液器，同時(shí)移液器和移液頭間連接應(yīng)緊密，建議取樣時(shí)移液頭應(yīng)剛進(jìn)液面，以免粘帶血清。稀釋液勿用滴瓶滴加，以免造成稀釋倍數(shù)的變化，對(duì)灰?guī)^(qū)造成誤判，使用移液器加樣較穩(wěn)定。
　
3.2　稀釋方式在板中加入100 μl稀釋液再加10 μl標(biāo)本，待樣品全部加完后混勻；預(yù)先進(jìn)行1∶11倍稀釋然后加到每孔中；在板中加入100 μl降稀釋液再加10 μl標(biāo)本，同時(shí)3次混勻。根據(jù)報(bào)道第1種方式易致非特異性IgC吸附到包被抗原或固相載體上，第2種方式在大量標(biāo)本檢測(cè)時(shí)亦不適用，以第3種方式為好。
　
4　溫育37 ℃溫育常采用三種方式即恒溫培養(yǎng)箱，水浴箱和電熱塊。根據(jù)報(bào)道以恒溫箱為主。由于培養(yǎng)箱中板的周圍都是37 ℃，而水浴箱的溫度指標(biāo)是水的溫度，雖然酶標(biāo)板漂浮在37 ℃水浴中板底37 ℃，但空氣溫度在開蓋時(shí)會(huì)下降（尤其在冬季），溫度上升比培養(yǎng)箱慢，達(dá)到37 ℃所需時(shí)間長(zhǎng)，導(dǎo)致吸光度下降。
　
5　洗板一般適用8或12孔頭，應(yīng)隨時(shí)注意孔頭是否堵塞，同時(shí)要求洗板后殘液<2 μl，即人工扣板墊紙不濕，浸泡時(shí)間>45 s.洗液預(yù)先用合格的蒸餾水配制并充分溶解，保持pH正常，定期清洗容器防止長(zhǎng)菌長(zhǎng)霉，這些都是防止花板，本底增設(shè)的重要措施。
　
6　顯色嚴(yán)格按照說明書控制顯色時(shí)間、溫度以免人為造成吸光底升降，而影響結(jié)果，加終止液后及時(shí)比色。TMB被認(rèn)為是ELISA反應(yīng)中最佳色原底物，但終止15 min后高濃度都易產(chǎn)生灰褐色絮狀沉淀并伴黃色漸退吸光下降，建議終止15 min內(nèi)及時(shí)比色。
　
7　酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定衛(wèi)生部明確規(guī)定酶標(biāo)試劑不得用目測(cè)法判定結(jié)果，食品和設(shè)備是搞好質(zhì)控和日常工作的前提和保證。所以酶標(biāo)儀必須質(zhì)量過關(guān)，性能穩(wěn)定，有報(bào)道介紹以490 nm甲基橙溶液為例的酶標(biāo)儀評(píng)價(jià)方法，內(nèi)容包括濾光片波長(zhǎng)、零點(diǎn)飄移、線性、精密度、通道差與孔間差等，具有較高的實(shí)用價(jià)值。經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分防止濾光片霉變，定期檢測(cè)校正，使其保持良好的工作性能。
　
8　質(zhì)控圖的制作ELISA室內(nèi)質(zhì)控方法一般沿用生化LJK圖進(jìn)行，利用westgard規(guī)則判定失控，應(yīng)首先做好OCV和RCVK以確定失控標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)際工作中取得好效果。“即刻法”質(zhì)控只需連測(cè)3次即可對(duì)3次進(jìn)行質(zhì)控，給基層單位帶來了方便。但其SDI設(shè)置是套用生化手段，在免疫檢測(cè)是否適用尚無定論，同時(shí)LJ圖不能判ELISA的特異性，鑒于ELISA試驗(yàn)?zāi)康脑谟跈z出抗原或抗體，因此要確保敏感性和特異性，故有人提出臨界值血清界定法。試劑所設(shè)陰陽對(duì)照為內(nèi)對(duì)照，另設(shè)臨界值，高值陽性和2份正常人陰性對(duì)照，作為外對(duì)照與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，臨界值S/CO>1，高值陽性S/CO>10，正常人陰性對(duì)照的A值在0.050～0.100，只要一項(xiàng)不符合即判為失控，高值為“HOOK”監(jiān)控，因此臨界值血清界既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性，實(shí)際工作中和質(zhì)控圖一起應(yīng)用。
　
9　結(jié)論室內(nèi)質(zhì)控的目的在于能控制實(shí)驗(yàn)室每天的檢測(cè)結(jié)果是否可靠，能否報(bào)告結(jié)果，是實(shí)驗(yàn)室管理的最基本措施。臨界值血清做室內(nèi)質(zhì)控血清可防止弱陽性發(fā)生標(biāo)本漏檢，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)隨需血所致醫(yī)療糾紛的一個(gè)關(guān)鍵證據(jù)。實(shí)驗(yàn)過程中失控現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生且以超下限為多見，致臨界值結(jié)果陰性，此點(diǎn)引起特別重視，必須將失控板重做并找出原因，以確保報(bào)告準(zhǔn)確性。由于開展了室內(nèi)質(zhì)控，工作人員責(zé)任心加強(qiáng)了，操作更規(guī)范，提高了實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的準(zhǔn)確性，有效保證了血液質(zhì)量。
　

（責(zé)任編輯：liushengbao）

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