第三節(jié)　提取與分離

重點：

提取的方法、分離的方法。

難點：

提取、分離方法的選擇；聚酰胺色譜法的應用、ph梯度萃取法的應用。

知識點一、提取

首先，回憶一下黃酮類化合物的溶解性：

游離黃酮：易溶于乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等，多不溶于水；溶于堿水；

（一）溶劑萃取法

 利用黃酮類化合物與混入的雜質極性不同，選用不同溶劑進行萃取可達到精制純化目的。例如植物葉子的醇浸液，可用石油醚處理，以便除去葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性色素。而某些提取物的水溶液經(jīng)濃縮后則可加入多倍量的乙醇，以沉淀除去蛋白質、多糖類等水溶性雜質。

有時溶劑萃取過程也可以用逆流分配法進行。常用的溶劑系統(tǒng)有：水一乙酸乙酯，正丁醇一石油醚等。

溶劑萃取過程在除去雜質的同時，往往還可以收到分離苷和苷元或極性苷元與非極性苷元的效果。

（二）堿提取酸沉淀法
原理：黃酮含有酚羥基，顯酸性，可用堿液提取。

常用堿水：稀naoh， na2co3，石灰水。

常用堿性稀醇：5% naoh的50%乙醇

酸沉：鹽酸

特點：此法簡便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取都采用了這個方法。

注意：

（1）酸堿濃度不宜過高（堿性過強，強堿在加熱時會破壞黃酮母核；酸性過強，生成烊鹽，導致析出的黃酮類化合物又重新溶解，降低產(chǎn)品收率。）

（2）當分子中有鄰二酚羥基時，應加硼酸保護。

（三）炭粉吸附法
主要適于黃酮苷類的精制，大部分黃酮苷類可用7%酚-水洗下。洗脫液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮后，再用乙醚振搖除去殘留的酚，余下水層減壓濃縮即得較純的黃酮苷類成分。

知識點二、分離

（一）柱色譜法
分離黃酮類化合物常用的吸附劑有硅膠、聚酰胺、葡聚糖凝膠及纖維素粉等。

1.硅膠柱色譜
此法應用范圍最廣，按照黃酮類化合物極性的大小先后洗脫，達到分離的目的。主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙醚化）的黃酮及黃酮醇類。

2.聚酰胺柱色譜
對分離黃酮類化合物來說，聚酰胺是較為理想的吸附劑。

吸附原理：聚酰胺分子中酰胺基與黃酮類化合物分子上的酚羥基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附作用。

黃酮類化合物從聚酰胺柱上洗脫時大體有下述規(guī)律。

 (1)苷元相同，洗脫先后順序一般是：叁糖苷，雙糖苷，單糖苷，苷元。

(2)母核上增加羥基，洗脫速度即相應減慢。當分子中羥基數(shù)目相同時，羥基位置對吸附也有影響，聚酰胺對處于羰基間位或對位的羥基吸附力大于鄰位羥基，故洗脫順序為：具有鄰位羥基黃酮，具有對位（或間位）羥基黃酮。

(3)不同類型黃酮化合物，先后流出順序一般是：異黃酮，二氫黃酮醇，黃酮，黃酮醇。

(4)分子中芳香核、共軛雙鍵多者易被吸附，故查耳酮往往比相應的二氫黃酮難于洗脫。

上述規(guī)律也適用于黃酮類化合物在聚酰胺薄層色譜上的行為。

3.葡聚糖凝膠（sephadex gel）柱色譜
對于黃酮類化合物的分離，主要用兩種型號的凝膠：

sephadex g型（親水性凝膠）

sephadex lh-20型  (羥丙基葡聚糖凝膠，水及極性有機溶劑均可)

用葡聚糖凝膠分離黃酮類化合物的機理是：
分離游離黃酮時，主要靠吸附作用。凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，數(shù)目越多，越難洗脫。

但分離黃酮苷時，則分子篩的性質起主導作用。在洗脫時，黃酮苷類大體上是按分子量由大到小的順序流出柱體。

（二）ph梯度萃取法

ph梯度萃取法適合于酸性強弱不同的黃酮苷元的分離。根據(jù)黃酮類苷元酚羥基數(shù)目及位置不同其酸性強弱也不同的性質，可以將混合物溶于有機溶劑（如乙醚）后，依次用5%nahco3、5%na2co3、0.2%naoh及4%naoh溶液萃取，來達到分離的目的。一般規(guī)律大致如下：

（三） 根據(jù)分子中某些特定官能團進行分離
在黃酮類成分的混合物中，具有鄰二酚羥基的成分與無此結構的成分，性質不同，可以進行分離。
1.鉛鹽沉淀法
有鄰二酚羥基的成分可被乙酸鉛沉淀，不具有鄰二酚羥基的成分可被堿式乙酸鉛沉淀，據(jù)此可將兩類成分分離。

2.硼酸絡合法
具有鄰二酚羥基的黃酮可與硼酸絡合，生成物易溶于水，借此也可與不具上述結構的黃酮類化合物相互分離。

總結： 不同的差別，采用不同的方法去提取分離。

x型題（多項選擇題）【2013年真題】

133.提取和分離黃酮類成分的常用方法有

a.酸提堿沉法      b.硅膠柱色譜法

c.ph梯度萃取法          d.堿提酸沉法

e.聚酰胺柱色譜法

答案：bcde